IND质粒工艺开发
近年来，细胞治疗的临床申报不断增加，而大量项目被未能通过审批的原因多样，其中药学研究问题占大多数，包括杂质、质量、一致性等问题。不能正确理解和满足法规要求是快速审批的瓶颈，对法规的研究、理解和解读成了成为能否成功获批临床申报的关键。金斯瑞蓬勃生物依据现行细胞治疗相关法规，独立开发验证了一套完整的IND申报用GMP质粒开发服务，按照申报要求，提供从质粒构建到原始记录申报资料整理的整体解决方案，致力加速基因细胞治疗产品IND申报进程。
平台优势
完善的平台 成熟的工艺
成功中美双报经验 经验丰富的团队
可信赖的品牌 可靠的质量
| 检测类别 | 检测项目 | |
|---|---|---|
| 常规 | 1 | 外观 |
| 2 | pH | |
| 纯度 | 3 | A260/A280比例 |
| 4 | 质粒DNA浓度 | |
| 5 | 超螺旋百分比 | |
| 6 | 残留宿主蛋白 | |
| 7 | 残留宿主DNA | |
| 8 | 残留宿主RNA | |
| 外源污染 | 9 | 内毒素试验 |
| 10 | 无菌试验 | |
| 质粒检定 | 11 | 限制性酶切 |
| 12 | 测序 | |
发酵工艺
- ✔ 高密度发酵
- ✔ 高产量
纯化工艺—3步层析纯化
1. 凝胶过滤层析—高效去除宿主残留RNA
琼脂糖凝胶电泳(AGE)：
凝胶过滤层析后，宿主RNA含量明显减少。
M1：超螺旋质粒梯状标志
M2：DNA 梯状标志
1：细胞裂解液
2：GF层析后的样品
3：盐洗脱废液
4：盐洗脱废液
5：水洗脱废液
R：RNA标志带
2. 疏水层析—明显提高超螺旋质粒含量
- 1：溶剂
- 2：开环质粒
- 3：超螺旋质粒
- 4：质粒二聚体
| Sample | Time | Area(%) | |
|---|---|---|---|
| GF-Elution | OC-Plasmid | 20.774 | 8.02 |
| SC-Plasmid | 21.723 | 83.17 | |
| dimer-Plasmid | 22.408 | 7.47 |
高效液相色谱 （HPLC）：
凝胶过滤层析后，超螺旋质粒含量达到83%。
- 1：溶剂
- 2：开环质粒
- 3：超螺旋质粒
- 4：质粒二聚体
| Sample | Time | Area(%) | |
|---|---|---|---|
| HIC-Elution | OC-Plasmid | 20.800 | 1.62 |
| SC-Plasmid | 21.790 | 94.07 | |
| dimer-Plasmid | 22.533 | 4.31 |
高效液相色谱 （HPLC）：
疏水层析后，超螺旋含量质粒达到95%。
3. 阴离子交换层析—高效去除内毒素
| 检测项目 | 检测方法 | 放行标准 |
|---|---|---|
| 内毒素 | LAL assay | < 10EU/mg |
隆耀生物与金斯瑞蓬勃生物签署技术合作协议
- 合作开发质粒病毒，协助IND申报；
- 金斯瑞蓬勃生物将为后期临床试验提供质粒和病毒的GMP生产；
- 强强联合，优势互补，共同推动中国CAR-T细胞治疗药品的产业化。
02.15.2019，南京
默克与金斯瑞蓬勃生物建立战略联盟
- 在基因细胞治疗领域全方位战略合作；
- 在质粒病毒生产质量体系与GMP合规，工艺与厂房设计以及市场推广方面的全面合作；
- 共同生产高质量的质粒DNA和病毒载体；
- 共同促进细胞免疫和基因治疗行业的产业化进程。
03.19.2019，南京
香雪精准与金斯瑞蓬勃生物签署战略合作协议
- 就细胞治疗项目中质粒与病毒相关的工艺开发、临床样本生产等方面展开合作；
- 共同推动中国细胞治疗药物的快速发展。
06.10.2019，广州