双抗活性检测-双特异性抗体功能活性检测服务-bsAb bioassay

双抗可以分别结合效应细胞（T细胞、NK细胞等免疫细胞）及靶细胞（多为肿瘤细胞）表面的抗原，引起效应细胞的激活及对靶细胞的杀伤。

蓬勃生物可以提供不同靶点的过表达/肿瘤细胞系及多种类型的免疫效应细胞，用于验证双特异性抗体对于两种细胞的桥接效果。

抗体类型	靶细胞	靶细胞上的靶点	效应细胞	效应细胞上的靶点	体外功能实验
T 细胞 engager	1. 过表达TAA的工程细胞系 2. 肿瘤细胞系	TAA/TSA	1. 各种原代细胞（T细胞/NK细胞/巨噬细胞/DC细胞etc.） 2. 报告基因细胞系	CD3	1. 原代免疫细胞实验（TDCC等） 2. 细胞因子释放实验 3. 报告基因实验
NK 细胞 engager				NK细胞激活性受体 (CD16A、NKG2D、NKp46、NKp30 等)	1. 原代免疫细胞实验（NK细胞介导的肿瘤细胞杀伤等） 2. 报告基因实验
Anti-TAA x刺激性免疫检查点				刺激性免疫检查点(CD40, 4-1BB, CD28 等)	1. 报告基因实验 2. 原代免疫细胞实验（免疫细胞激活、肿瘤细胞杀伤、混合淋巴细胞反应 (MLR)等）
Anti-TAA x TAA/抑制性免疫检查点				NK细胞激活性受体CD16A、巨噬细胞激活性受体CD32A	1. 报告基因实验 2. 原代免疫细胞实验（ADCP等）

肿瘤相关抗原（tumor-associated antigen, TAA）/肿瘤特异性抗原（tumor-specific antigen, TSA）由于在肿瘤中高表达，在正常细胞中低/不表达，所以经常被作为细胞桥接机制BsAb分子中靶细胞表面的结合抗原。

案例分享

案例一：Anti-CD3×TAA BsAb T 细胞 engager活性评价

1. TDCC实验

TDCC实验结果显示，anti-CD3×TAA BsAb可以引起原代CD8+ T细胞对TAA高表达的肿瘤细胞的杀伤。
2. 报告基因实验

报告基因实验结果显示，anti-CD3×TAA BsAb可以引发T细胞激活信号通路。

案例二：Anti-TAA × 刺激性免疫检查点BsAb活性评价

Anti-4-1BB×TAA BsAb报告基因实验

4-1BB报告基因实验结果显示，anti-4-1BB×TAA BsAb在CHO-K1/TAA细胞与4-1BB报告基因细胞共孵育的体系中，可以显著激活4-1BB信号通路（左图）。但是，anti-4-1BB×TAA BsAb在CHO-K1细胞与4-1BB报告基因细胞共孵育的体系中，4-1BB信号通路的激活十分微弱（右图）。

双靶点阻断

双靶点阻断是BsAb重要的靶向机制，常用于肿瘤治疗和自身免疫性疾病治疗领域。

基于双靶点阻断作用机制，蓬勃生物可以提供多种体外功能实验，帮助客户筛选不同靶点/同靶点不同表位的双特异性抗体。

抗体类型	靶点组合	体外功能实验
阻断血管生成/肿瘤发生	VEGF & ANG2, Her2 & Her2, EGFR & c-Met, VEGF & DLL4 等	1. 信号通路实验 2. 报告基因实验 3. 酶活实验 4. 细胞因子/趋化因子释放实验 5. 抗体内化实验 6. 细胞增值实验 7. 原代细胞实验（ADCC, MLR等）
靶向肿瘤生长微环境	TGFβ & PDL1, TGFβ & CD73, TGFβ & CD39等
炎症/自身免疫性疾病通路	TNFα & IL17A, IL4 & IL13, BAFF & IL17A 等
阻断血管生成/肿瘤发生 & 免疫检查点抑制剂	VEGF & PD1, EGFR & PD1, Her2 & PD1 等

案例分享

案例一：阻断血管生成/肿瘤发生BsAb活性评价

VEGF & ANG2信号通路实验

p-AKT实验结果显示，相较于单独加入anti-ANG2 mAb或anti-VEGF mAb，联合anti-ANG2 mAb和anti-VEGF mAb可以更好地降低ANG2和VEGF引起的血管内皮细胞胞内p-AKT水平。该方法可以用于anti-ANG2×VEGF BsAb的体外功能活性评价。
案例二：炎症/自身免疫性疾病通路BsAb活性评价

TNFα & IL17A 趋化因子释放实验

CXCL1实验结果显示，相较于单独加入anti-TNFα mAb或anti-IL17A mAb，联合anti-TNFα mAb和anti-IL17A mAb可以更有效地降低TNFα和IL17A引起的细胞CXCL1的释放。该方法可以用于anti-TNFα×IL17A BsAb的体外功能活性评价。

双免疫细胞表面靶点（免疫细胞激活）

临床上采用免疫检查点单抗药物治疗的患者，客观应答率（objective response rate, ORR）仍然比较低。因此，以联合用药产生的协同效应为理论基础，旨在加强免疫细胞的激活，靶向两个免疫细胞表面靶点的BsAb已成为研究热点。

基于免疫细胞激活作用机制，蓬勃生物可以提供不同靶点组合的单靶点/双靶点报告基因细胞系，同时我们可以提供定制化的原代细胞实验，帮助客户筛选出相较于mAbs，对免疫细胞有更强激活作用的BsAb。

抗体类型	靶点组合	体外功能实验
免疫检查点抑制剂&免疫检查点抑制剂	PD-1 & TIGIT, PD-1 & CTLA4等	1. 报告基因实验 2. 原代免疫细胞实验（免疫细胞激活、MLR 等）
免疫检查点抑制剂&免疫检查点激动剂	PD-1 & 4-1BB, PD-1 & OX40等
免疫检查点激动剂&免疫检查点激动剂	4-1BB & CD40, 4-1BB & OX40等

案例分享

案例一：Anti-抑制性免疫检查点×抑制性免疫检查点BsAb活性评价

PD-1 & CTLA4双靶点报告基因实验

实验结果显示，相较于单独加入anti-PD-1 mAb或anti-CTLA4 mAb，联合anti-PD-1 mAb和anti-CTLA4 mAb可以更好地激活PD-1&CTLA4双靶点报告基因细胞系。该细胞系可以用于anti-PD-1×CTLA4 BsAb的体外功能活性评价。
案例二：Anti-激动性免疫检查点×抑制性免疫检查点BsAb活性评价

4-1BB & PD-1/PD-L1双靶点报告基因实验

实验结果显示，相较于单独加入anti-PD-L1 mAb或anti-4-1BB mAb，联合anti-PD-L1 mAb和anti-4-1BB mAb可以更好地激活4-1BB&PD-1/PD-L1双靶点报告基因细胞系。该细胞系可以用于anti-4-1BB×PD-1/PD-L1 BsAb的体外功能活性评价。

同一细胞表面蛋白桥接（引发细胞下游信号通路）

BsAb的两个抗原结合臂可以结合同一细胞表面的两种抗原，通过细胞表面蛋白复合体的形成，引发细胞下游信号通路。

基于BsAb通过对同一细胞表面蛋白桥接引发不同类型的下游信号通路，蓬勃生物可以提供多种类型的体外功能实验（细胞活性实验，凝血因子实验等），帮助客户评价BsAb的体外功能活性。